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淺析胰酶的使用注意事項(xiàng)及配置方法

更新時(shí)間:2017-10-14 點(diǎn)擊次數(shù):2717
胰酶使用注意:
1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。
胰酶配置方法:
1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對(duì)細(xì)胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
2、生理鹽水配制,要先調(diào)ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250) 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時(shí),調(diào)pH 7.8-8.0,過(guò)濾除菌。)
3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜,過(guò)濾滅菌,分裝,4℃保存?zhèn)溆?。? 或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液(pH7.2 左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4 小時(shí)或冰箱過(guò)夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過(guò)濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度?.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 至7.2 左右。)
一般0.45微米的一次性濾器過(guò)濾除菌,至于作用效果,需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。
4、是否需要四度放置過(guò)夜,取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過(guò)夜. 而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō),四度放置過(guò)夜,給細(xì)菌生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),盡管過(guò)濾可以出去細(xì)菌,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。
胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:
1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性
2、溶液ph值不對(duì)
3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正常現(xiàn)象,因胰酶多取自動(dòng)物胰腺,沉淀為組織塊,過(guò)濾后即可
想了解更多胰酶信息歡迎客服  

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