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細(xì)胞培養(yǎng)器的相關(guān)知識介紹

更新時間:2022-05-11 點(diǎn)擊次數(shù):702
   細(xì)胞的生長需要營養(yǎng)環(huán)境,用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)以及生理代謝等基本理論的研究工作。液體培養(yǎng)基中加入一定的凝固劑(如瓊脂)或固體培養(yǎng)物(如麩皮、大米等)便成為固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基為細(xì)胞的生長提供了一個營養(yǎng)及通氣的表面,在這樣一個營養(yǎng)表面上生產(chǎn)的細(xì)胞可形成單個菌落。因此,固體培養(yǎng)基在細(xì)胞的分離、鑒定、計數(shù)等方面起著相當(dāng)重要的作用。從多細(xì)胞生物中分離所需要細(xì)胞和擴(kuò)增獲得的細(xì)胞以及對細(xì)胞進(jìn)行體外改造,觀察,必須解決細(xì)胞離體培養(yǎng)問題,同微生物細(xì)胞培養(yǎng)的難易相比,比較困難的是來自多細(xì)胞生物的單細(xì)胞培養(yǎng),特別是動物細(xì)胞的培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)泛指所有體外培養(yǎng),其含義是指從動物活體體內(nèi)取出組織,于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下,進(jìn)行孵育培養(yǎng),使之生存并生長。細(xì)胞培養(yǎng)工作現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個領(lǐng)域,成為zui重要的基礎(chǔ)科學(xué)之一。
  一、細(xì)胞培養(yǎng)器復(fù)蘇
  1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。
  2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
  3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
  4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到37℃的5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
  5.根據(jù)細(xì)胞增長速度2-3天換一次培養(yǎng)基。
  二、細(xì)胞培養(yǎng)器傳代
  1.培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。
  2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
  3.加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
  4.細(xì)胞都變圓后加入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
  5.用移液槍吹打細(xì)胞,讓細(xì)胞懸浮起來。
  6.把細(xì)胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
  7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。
  8.根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個,正常細(xì)胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
  三、細(xì)胞培養(yǎng)器凍存
  把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃夜,然后放到液氮灌中保存。
  凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。
 

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