无码系列久久久人妻无码系列,亚洲一区中文字幕不卡,欧美日本一区二区三区精品免费,欧洲国产伦久久久久久久

服務熱線

15021010459
新聞中心
當前位置:主頁 > 新聞中心 > 怎么使用干細胞無血清培養(yǎng)基

怎么使用干細胞無血清培養(yǎng)基

更新時間:2015-08-11 點擊次數(shù):1250
     干細胞無血清培養(yǎng)基和試劑在培育無脊椎動物和哺乳動物細胞來備置單克隆抗體方面被廣泛的應用,還有病毒抗原和重組蛋白等。干細胞無血清培養(yǎng)基是不用增加血清就能夠保持細胞在體外比較長時刻成長繁衍的組成培養(yǎng)基。
    大部分的干細胞無血清培養(yǎng)基擁有向細胞中轉(zhuǎn)輸離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)理葡萄糖攝取量的胰島素,還有一部分蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,綜上所指的蛋白在細胞培育中具有各自不一樣的功用,如供給細胞貼壁所要的基質(zhì),抗生物反應器剪切力,供給細胞貼壁所需的基質(zhì),作為脂類和其他生長因子的載體等。
    干細胞無血清培養(yǎng)基和試劑被廣泛的應用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。大多數(shù)的無血清培養(yǎng)基含有向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應器剪切力,作為脂質(zhì)和其他生長分化因子的載體等。
   

使用方法

    目前,血清仍是動物細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
    為了使細胞適應無血清培養(yǎng),關鍵的是使所培養(yǎng)細胞:
    1.處于對數(shù)生長中期
    2.>90% 活細胞率
    3.適應時以較高的起始細胞接種
    細胞適應無血清培養(yǎng)基的方法
    1.直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。
    一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞*適應了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
    2.連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應相比較,連續(xù)適應趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/div>
    (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
    (2)當細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
    (4)當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
    建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,直到每一次細胞適應了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。
    在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養(yǎng)基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì),因而更易于受外界因素的影響。
    細胞培養(yǎng)適應替代血清:許多細胞利用連續(xù)適應方法能很好的適應,用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1(v∶v)的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式,連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應改變血清比例時,傳代細胞2到3次。
    培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長的延遲可能會發(fā)生,4允許進行2到3次的傳代,使生長率恢復到以前的水平。
    特別需要強調(diào)的是:配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水,如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微,也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。
 

2025 版權所有 © 重慶市華雅干細胞技術有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術支持:化工儀器網(wǎng)

地址:重慶市江北區(qū)金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

重慶市華雅干細胞技術有限公司主要經(jīng)營干細胞研究 干細胞治療產(chǎn)品 生物試劑 實驗耗材 藥物研發(fā)等產(chǎn)品。

關注我們

服務熱線

400-021-2200

掃一掃,關注我們

欧美三级韩国三级日本三斤-日本不卡一区不卡二区| 亚洲精品一区网站在线观看-黄页视频免费观看网站| 一区二区三区日本韩国欧美-日本1区2区3区4区在线观看| 国产免费一区二区三区不-日本少妇免费一区二区三区| av网址在线直接观看-黄色av全部在线观看| 一级小黄片在线免费看-亚洲欧美午夜情伊人888| 乱入一二三免费在线观看-久久精品亚洲精品国产色婷婷| 亚洲区欧美区在线视频-亚洲碰碰人人AV熟女天堂| 欧美日韩国产在线资源-超碰成人国产一区二区三区| 18禁真人在线无遮挡羞免费-中文字幕精品一区二区三区四区| 欧美精品午夜一二三区-a屁视频一区二区三区四区| 国产欧美成人精品第一区-日本黄色精品一区二区| 一级小黄片在线免费看-亚洲欧美午夜情伊人888| 中文字幕亚洲综合久久最新-久久精品视频免费久久久| av噜噜国产在线观看-欧美视频亚洲视频一区二区三区| 日韩精品亚洲不卡一区二区-成人网在线视频精品一区二区三区| 欧美日本亚一级二级三区久久精品-日韩欧美一区二区久久婷婷| 日本中文字幕永久在线人妻蜜臀-欧美一区二区的网站在线观看| 成人免费资源在线观看-欧美国产日韩高清在线综合| 天天干天天干2018-91人妻人人澡人爽精品| 俄罗斯胖老太太黄色特级片-国产精品黑丝美腿美臀| 天天日天天干天天综合-99久久综合狠狠综合久久| 欧洲精品一区二区三区中文字幕-91久久国产综合久久蜜月精品| 国产精品电影在线一区-亚洲国产大片一区二区官网| 亚洲午夜久久久精品影院-性感美女在线观看网站国产| 久久夜色精品亚洲噜国产av-大香蕉伊人猫咪在线观看| 亚洲日本一区二区三区黄色电形-中文字幕乱码免费熟女| 亚洲最新国产无人区123-黄片一区二区在线观看| 亚洲av高清一区三区三区-久久人妻夜夜做天天爽| 亚洲av综合av一区东京热-黄页免费视频网站在线观看| 一区二区国产高清在线-日本高清无卡一区二区三区| 欧美aa一级视频播放-久一一区二区三区大香蕉| 天天日天天干天天综合-99久久综合狠狠综合久久| 中文字幕日本在线资源-国产+成+人+亚洲欧洲自线| 中文不卡一区二区三区-老司机在线老司机在线一区| 精品国产综合一区二区三区-蜜臀一区二区三区刺激视频| 国产小黄片高清在线观看-涩涩鲁精品亚洲一区二区| 欧美日韩国产综合四区-爆操极品尤物熟妇14p| 黄片免费观看视频下载-国产丝袜诱惑在线视频| 国产一级片久久免费看同-麻豆精品尤物一区二区青青| 亚洲日本一区二区三区黄色电形-中文字幕乱码免费熟女|