无码系列久久久人妻无码系列,亚洲一区中文字幕不卡,欧美日本一区二区三区精品免费,欧洲国产伦久久久久久久

服務熱線

15021010459
新聞中心
當前位置:主頁 > 新聞中心 > 怎么使用干細胞無血清培養(yǎng)基

怎么使用干細胞無血清培養(yǎng)基

更新時間:2015-08-11 點擊次數(shù):1250
     干細胞無血清培養(yǎng)基和試劑在培育無脊椎動物和哺乳動物細胞來備置單克隆抗體方面被廣泛的應用,還有病毒抗原和重組蛋白等。干細胞無血清培養(yǎng)基是不用增加血清就能夠保持細胞在體外比較長時刻成長繁衍的組成培養(yǎng)基。
    大部分的干細胞無血清培養(yǎng)基擁有向細胞中轉(zhuǎn)輸離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)理葡萄糖攝取量的胰島素,還有一部分蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,綜上所指的蛋白在細胞培育中具有各自不一樣的功用,如供給細胞貼壁所要的基質(zhì),抗生物反應器剪切力,供給細胞貼壁所需的基質(zhì),作為脂類和其他生長因子的載體等。
    干細胞無血清培養(yǎng)基和試劑被廣泛的應用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。大多數(shù)的無血清培養(yǎng)基含有向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質(zhì),抗生物反應器剪切力,作為脂質(zhì)和其他生長分化因子的載體等。
   

使用方法

    目前,血清仍是動物細胞培養(yǎng)中zui基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。
    為了使細胞適應無血清培養(yǎng),關鍵的是使所培養(yǎng)細胞:
    1.處于對數(shù)生長中期
    2.>90% 活細胞率
    3.適應時以較高的起始細胞接種
    細胞適應無血清培養(yǎng)基的方法
    1.直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中。
    一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×10~4×10細胞/ml時,細胞*適應了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
    2.連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基(SFM)中,與直接適應相比較,連續(xù)適應趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/div>
    (1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基:25%SFM 混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
    (2)當細胞密度>5×10細胞/ml時,以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (3)以2×10到3×10細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
    (4)當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml(接種后4到6天),在100%SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
    (5)每隔3到5天,當細胞密度達到1×10到3×10細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。
    建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物,直到每一次細胞適應了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。
    在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養(yǎng)基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì),因而更易于受外界因素的影響。
    細胞培養(yǎng)適應替代血清:許多細胞利用連續(xù)適應方法能很好的適應,用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1(v∶v)的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式,連續(xù)幾代減少當前培養(yǎng)基的量:1∶2,1∶4,1∶16和100%替代培養(yǎng)基。每次適應改變血清比例時,傳代細胞2到3次。
    培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清,生長的延遲可能會發(fā)生,4允許進行2到3次的傳代,使生長率恢復到以前的水平。
    特別需要強調(diào)的是:配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水,如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微,也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關鍵因素之一。
 

2025 版權所有 © 重慶市華雅干細胞技術有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術支持:化工儀器網(wǎng)

地址:重慶市江北區(qū)金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

重慶市華雅干細胞技術有限公司主要經(jīng)營干細胞研究 干細胞治療產(chǎn)品 生物試劑 實驗耗材 藥物研發(fā)等產(chǎn)品。

關注我們

服務熱線

400-021-2200

掃一掃,關注我們

久久精品亚洲国产av久-国产精品视频一区二区免费| 蜜臀av日日欢夜夜爽一区-av在线免费永久播放| 人妻少妇无乱码中文字幕-人成免费视频一区二区| 夜夜久久国产精品亚州av-欧美大屁股一区二区三区| 黄片黄片在线免费观看-激情综合网激情五月俺也去| 一级特黄大片亚洲高清-国产精品视频伊人久久| 91亚洲美女视频在线-熟妇人妻精品一区二区三区蜜臀| 日韩精品一区二区三区十八-日韩人妻少妇一区二区三区| 中文字幕偷拍亚洲九色-亚洲视频不卡一区二区天堂| 亚洲一区二区三在线观看-国产精品亚洲а∨天堂123| 日韩二级视频在线观看-美女扒开奶罩露出奶子的视频网站| 亚洲综合久久综合激情-日韩欧美精品人妻二区少妇| 十九禁止观看无码视频-亚洲国产激情福利专区| 久久网址一区二区精品视频-日产国产欧美视频一区精品| 亚洲av综合av一区东京热-黄页免费视频网站在线观看| 亚洲精品蜜桃在线观看-国产欧美日韩在线观看精品观看| 国产黄污网站在线观看-成人av电影中文字幕| 在线成色中文综合网站-国产二区精品视频在线观看| 亚洲综合av一区二区三区-高潮又爽又黄无遮挡激情视频| 人妻互换精品一区二区-夜夜爽一区二区三区视频| 国产精品久久久精品一区-99久久免费精品国产男女性高好| 久久精品人妻一区二区三区极品-久久99热这里只有精品免费| 看肥婆女人黄色儿逼视频-秋霞电影一区二区三区四区| 交换朋友的妻子中文字幕-日本美女8x8x8x8| 亚洲精品蜜桃在线观看-国产欧美日韩在线观看精品观看| 青青操大香蕉在线播放-国产亚洲欧美精品在线观看| 黑丝av少妇精品久久久久久久-中文字幕久久久人妻无码| 久久精品人妻一区二区三区极品-久久99热这里只有精品免费| 青青草原免费国产在线视频-精品人妻乱码一区二区三区四区| 亚洲欧美另类综合偷拍-婷婷社区综合在线观看| 欧美一级二级三级在线看-日韩精品欧美嫩草久久99| 婷婷人妻少妇激情在线-欧美日韩人体艺术一区二区| 性色国产成人久久久精品二区三区-偷窥中国美女洗澡视频| 99精品只有久久精品免费-蜜臀一区二区三区精品久久久| 国语自产偷拍精品视频偷拍-国产伊人这里只有精品视频| 可以免费看污污视频的网站-日韩欧美不卡视频在线观看| 久久精品国产96精品-日韩人成理论午夜福利| 久色高清精品在线国产-国产精品视频一区三区四区| hd在线观看一区二区-免费一区二区三区毛片在线| 久久久噜噜噜久久狠狠50岁-精品一区二区三区av| 人妻丝袜中文字幕在线视频-亚洲成av人片一区二区三区|